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光散射法用于膜蛋白结构研究

发布时间:2013-01-02   点击次数:971次
  膜蛋白和脂质体组成生物膜,生物膜对生命起 着重要的作用。为了弄清膜蛋白在组成生物膜中所 起的作用及功能,了解膜蛋白的结构非常重要。 

膜蛋白通常只溶解在胶束溶液中,因此表征脂 质体溶剂中低聚态的膜蛋白相当困难。本文利用多 角度激光光散射仪(MALS)、紫外检测器(UV)与 示差折光检测器(DRI)联用技术测定蛋白核、脂 质体胶束、蛋白-脂质体复合物分子量以及各组分的 含量。

1 是膜蛋白经 SEC 色谱柱分离后的色谱图。 其测定系统组成为:DAWN MALS多角度激光光散 射仪、(280nm)紫外检测器、示差折光检测器。

为了保持溶液状态的膜蛋白,必须使含有脂质 体膜蛋白在流动相中的浓度比其临界胶束浓度高。 因为膜蛋白-脂质体配合物具有与标准球蛋白非常 不同的构型,所以它们对色谱柱填料也有非常不同 的吸附特性以及洗脱特征曲线。因此,采用传统的 色谱柱校准法依据洗脱时间来确定膜蛋白的分子量 所得数据可信度极大降低。

而采用 MALSUV DRI 联用技术可测得膜蛋 白核、脂质体胶束及蛋白-脂质体复合物的分子量。 如图 2 所示。此图表明蛋白-脂质体复合物中的膜蛋 白是以单体状态存在(分子量为 62kDa)。

本实验清晰的表明 MALSUV DRI 联用技术 是一种独特的、功能强大的表征膜蛋白的手段;不 仅如此,该方法同样适用于表征蛋白类修饰复合物, 如:聚乙二醇 PEG 蛋白、糖基化蛋白等。

1:表示膜蛋白的 MALS(上)、UV(中)以及 DRI(下)的色谱图信号

光散射法用于膜蛋白结构研究 
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This note graciously submitted by David Veesler, Architecture et Fonction des Macromolécules Biologiques, Unité Mixte de Rech- erches UMR6098, CNRS, de Provence Université de la Méditerranée, Marseille France.

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